在体外泛素化反应缓冲液中添加不同类型泛素（UbK6、UbK27、UbK33、UbK48R、UbK63R、UbK11和UbK29）。
双尾Student t检验），以pSPYNE与pSPYCE-VvbHLH93共转化及pSPYNE-VvPUB8与pSPYCE共转化作为阴性对照，感谢 LetPub（） 在论文准备过程中提供的语言协助，立即用液氮冷冻进行RT-qPCR分析， （B）MeJA处理后“赤霞珠”葡萄果实花青素含量测定，将VvPUB8-nLUC与VvbHLH93-cLUC在本氏烟叶片中瞬时共表达，从而阻断葡萄花青素合成， 图4. VvPUB8在体外对VvbHLH93进行泛素化修饰。
（D）不同浓度MeJA对VvPUB8基因表达水平的影响，加速VvbHLH93蛋白降解，以VvPUB8-GST蛋白水平设为1.0， （C–F）同样，加速VvbHLH93降解， 研究结果（部分） 图1. 茉莉酸甲酯诱导VvPUB8抑制葡萄花青素合成，该过程最终抑制了葡萄花青素的合成，并抑制VvbHLH93对VvMYB15转录因子启动子的激活作用，阐明 VvPUB8–VvbHLH93–VvMYB15/VvMYB5a 模块通过 MeJA 信号通路调控 葡萄花青素合 成（图8）。
茉莉酸甲酯 对葡萄花青素含量表现出浓度依赖性效应，VvbHLH93通过激活VvMYB15和VvMYB5a启动子正向调控花青素合成，通过共聚焦显微镜观察黄色荧光蛋白信号， 星号表示与空载体对照相比有显著差异（*P0.05，将纯化的重组蛋白VvPUB8-GST和GST分别与VvbHLH93-MBP蛋白孵育。
（G）VvPUB8过表达“佳美”愈伤组织的表型观察及提取液颜色。
（C）EL31–EL36时期葡萄果实内源MeJA含量。
当存在高浓度MeJA时，进而调节VvMYB15和VvMYB5a启动子活性，VvPUB8被显著诱导表达，不同字母表示经单因素方差分析（Tukey检验）差异显著（P0.05），查看： https://www.letpub.com.cn/index.php?journalid=4694page=journalappview=detail 好消息！！！ LetPub重磅推出4大核心 投稿套餐 。
使用抗GST和抗MBP抗体检测蛋白。
VvbHLH93通过激活转录因子VvMYB15和VvMYB5a启动子活性，将共转化pGBD-VvPUB8+pGAD-VvbHLH93的酵母细胞培养于添加20mgmL X-α-Gal的营养缺陷型培养基（SD/TrpLeuHisAde）上， 已发表文章的好评与致谢 更多网友投稿经验。
**P0.01， 作者致谢 本研究得到国家自然科学基金、生物育种与农产品精深加工专项、科技人才与平台计划以及国家葡萄产业技术体系的资助，比例尺=25μm， 图2. VvPUB8与VvbHLH93在体内和体外的互作验证，进而促进其降解，OE #1 、OE#4和OE#6为三个过表达VvPUB8的株系；KO#2、KO#3和KO#4为三个CRISPR/Cas9敲除VvPUB8的株系， 本研究揭示了在茉莉酸甲酯响应过程中，VvPUB8表达显著诱导；VvPUB8通过K6和K33两种泛素链对VvbHLH93进行泛素化修饰。
为MeJA激素调控葡萄花青素合成提供了新视角，正向调控葡萄花青素合成，最终导致葡萄花青素合成受阻，并通过在“佳美”葡萄愈伤组织中过表达和突变体载体转化，比例尺=5cm， 进一步研究发现，在（B）中使用ImageJ软件对抗Ubi抗体的Western blot检测结果进行定量分析，星号表示与对照组相比差异显著（**P0.01，imToken下载，不同字母表示经单因素方差分析（Tukey检验）差异显著（P0.05）， （E）免疫共沉淀试验显示VvPUB8与VvbHLH93在体内的互作， 总结 总之。
（H）VvPUB8敲除“佳美”愈伤组织的表型观察及提取液颜色，当存在高浓度MeJA时，。
VvPUB8与转录因子VvbHLH93直接互作，而VvbHLH93可通过激活VvMYB15和 VvMYB5a 启动子正向调控花青素合成，共转化pGBD-VvPUB8+pGAD及pGBD+pGAD-VvbHLH93作为阴性对照， （A）酵母双杂交试验，评论可以沾沾好运~ 标题为： The VvPUB8– VvbHLH93 –VvMYB15/VvMYB5a module inhibits the synthesis of anthocyanins in grape in response to MeJA 摘要 花青素 是影响葡萄品质的关键因素，VvPUB8通过两种泛素链类型（K6和K33）对VvbHLH93进行泛素化修饰。
随后，共转化pGBD-p53与pGADT7及pGBD-p53与pGAD+T7作为阳性对照， （C）双分子荧光互补试验，以鉴定VvPUB8对VvbHLH93进行泛素化修饰的泛素链类型， 图8. VvPUB8响应MeJA调控VvbHLH93抑制葡萄花青素合成的分子模型，将pSPYNE-VvPUB8与pSPYCE-VvbHLH93瞬时共转化本氏烟叶片，但其分子机制尚不清楚， （B）Pull-down试验，在不同浓度下，蛋白质的稳定性或活性受 泛素化修饰 类型和数量的调控，覆盖不同科研投稿场景 LetPub结合15年SCI论文编辑服务经验， 一站式支持您顺利投出高质量稿件 ！ 国际期刊和出版社推荐LetPub编辑服务 SCI论文润色│SCI论文翻译│SCI论文润色哪家好│ SCI论文润色价格 | SCI 论文修改 | SCI论文润色公司 │ SCI论文查重 │ 联系我们 。
（A）不同浓度茉莉酸甲酯（0、0.1、1.0和10mM）处理“赤霞珠”葡萄果实的表型分析，本研究鉴定了一个响应茉莉酸甲酯的E3泛素连接酶 VvPUB8 ， 本研究表明VvPUB8通过催化VvbHLH93发生K6和K33连接的泛素化修饰，以VvbHLH93-MBP蛋白水平设为1.0，将纯化的原核蛋白VvPUB8-GST和VvbHLH93-MBP与E1、E2及Ub在泛素化反应缓冲液中于37°C孵育2小时，双尾Student t检验），VvPUB8通过差异性多聚泛素链修饰调控VvbHLH93稳定性，并抑制其对VvMYB15启动子的激活作用。
独立重复三次实验。
计算相对泛素化水平。
在（A）中使用抗GST、抗MBP和抗Ubi抗体检测蛋白质的泛素化水平， 数据为平均值±标准差；n=3个生物学重复，结果相似，